Diabetologia：激活但机制受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现借助于家兔自身抗纤到显现借助于1同型心血管疾病临床研究症状的的工业发展数万人在成年人时期就有很好的说明了，多个家兔自身抗纤阴性的成年人中会有70%在人体内转换后10年内患有心血管疾病，而随访15年的成年人这一数量减低到84%。相比之下之下，占临床研究1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的发病该系统还并未得到充分的研究。

越来越多的人开始用作分期该系统来定义1同型心血管疾病的的工业发展：母纤在显现借助于多种家兔自身抗纤时带入第1过渡阶段，显现借助于血糖近于其时带入第2过渡阶段，显现借助于症状时带入第3过渡阶段。一些多发家兔自身抗纤阴性的母纤，在1期和2期，的工业发展较很慢，并工业发展为发病的1同型心血管疾病。我们之后说明了了一第三组在首次探测到多种家兔自身抗纤取样后至寡10年无心血管疾病的近于很慢的工业发展者，这第三组高血压人数寡，但特质十分明确。随后，我们发现家兔自身复合物特异性CD8+T蛋白中间体在的工业发展减很慢的高血压中会必需不存在，但在近期发病和长期存在的心血管疾病高血压中会很容易探测到。这可能声称，与的工业发展高血压相比之下，这些高血压自身免疫中间体的适度增强。

早期研究声称，尽管适度性T蛋白(Treg)数量显现借助于近于其，但心血管疾病高血压存在一些动态瑕疵，其中会包括对IL-2的中间体能力减缓。此外，心血管疾病高血压中会的震荡将CD4+T蛋白可能对适度更具抵抗性，表现为震荡将T蛋白的诱导减弱，共存造成的Treg和纤外造成的诱导Treg，以及复合物境遇的CD4+T蛋白中会IL-2中间体减弱。本研究的目的是说明了了CD4+适度性T蛋白(Treg)在一小群近于减很慢的工业发展者中会的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁一般而言就诊的高血压亲属中会鉴定1同型心血管疾病的危险因素。我们之后说明了了长期减很慢的工业发展者的特质，他们持续保持多重家兔自身抗纤阴性超过10年，但并未显现借助于心血管疾病的临床研究症状，很慢性或非同步癫痫自身免疫。随后，10名继续持续保持无心血管疾病并不愿提供大量血液循环取样的减很慢的工业发展者纳入T和B蛋白动态深入研究。在目前的研究中会，8名很慢的工业发展者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗纤阴性。所有的参与者都处于1同型心血管疾病的工业发展的1期，尽管一些人随后挽回了家兔自身抗纤对某些复合物的阴性中间体，然而，一名高血压已经处于2期至寡6年，但并未显现借助于临床研究症状，一名高血压被鉴定为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中会对该供纤同步进行了分开评量。分立外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白术和T蛋白诱导试验评量供纤中会Treg的频带、表同型和动态。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无督导聚类深入研究，评量Treg表同型。

结果：与健康供纤相比之下，来自很慢的工业发展纤的思绪CD4+T蛋白的督导聚类看借助于，启动时的思绪CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c上升时的高血压与的工业发展减很慢者和匹配的对照第三组相比之下，Treg谱有所不同。动态深入研究声称，与健康供纤相比之下，来自减很慢的工业发展纤的Treg激活着的CD4+震荡将T蛋白诱导明显受损。表现为对震荡将CD4+T蛋白CD25和CD134解读的诱导减低。

所示1 深入的表同型深入研究看借助于，CD4+Treg亚同型在很慢的工业发展说明了符中会减低。由FlowSOM分解成的Treg室，涌进在来自所有供纤的活着CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示借助于物解读鉴定借助于10个元簇:思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用作9个不同Treg标示借助于分解成的10个元簇的MST。每个端口代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在端口第三组周围上色。每个端口中会的饼所示指出单个标示借助于的解读档次。(b)每个元聚类的热所示，以看借助于整纤标示借助于解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)更为核素为每个metacluster盒线所示(核素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白(l)。深蓝色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模同型证实，Treg频带的减低是的工业发展减很慢的标志。国际标准门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)更为SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分立，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第三组以及供纤SP 606(深蓝色)中会CD25+ cd127的频带汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD说明了符之间的不同。(j)盒线所示看借助于了在SP(黑纹)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的更为核素(数量)。(k)直方所示看借助于每个簇的表同型(深蓝色)和Treg标示借助于更为解读与背景解读(浅蓝色);上列，闪存Treg_3;下面动身，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中会标示借助于的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩鉴定

所示3 与健康献血者相比之下，的工业发展减很慢者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T蛋白元簇(思绪T蛋白_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个解读标示借助于的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)说明了符的解读热所示(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(白色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，看借助于直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和鉴定，p< 0.07(深蓝色)所有供纤包括，p< 0.05(浅蓝色)供纤SP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从国际标准门控，从所有HD(白色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，看借助于直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩鉴定

所示4 来自减很慢的工业发展的CD4+ treg蛋白控制震荡将CD4+T蛋白的能力减缓。SP第三组用浅蓝色的线和带子指出，HD第三组用黑色的线和带子指出，深蓝色的线/带子指出供纤sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标示借助于为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培训3同一天同步进行流式蛋白术探测。(a-d)与CD4+；也者更为应将的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。用作阴性对照(启动时的叛离蛋白不含treg)量度诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

所示5 震荡将CD4+T蛋白对减很慢的工业发展的T蛋白转化的诱导更适合于。SP第三组用浅蓝色的线和带子指出，HD第三组用黑色的线和带子指出，深蓝色的线/带子指出供纤sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示借助于，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培训3同一天同步进行流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱导前年(b)。(c,d) CD25诱导前年(c)和CD134诱导前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

论断：我们得借助于的论断是，来自减很慢的工业发展子的转化思绪CD4+Treg在GITR解读中会得到了扩充和丰富，强调了进一步研究Treg在1同型心血管疾病风险母纤中会的举例来说的更进一步。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28